Investigação do papel da metaloproteinase de matriz 9 em diferentes condições patológicas

A hipótese deste estudo é de que o aumento de metaloproteinase de matriz (MMP-9), por administração recombinante ou envelhecimento, induz alterações fisiopatológicas no sistema sistema nervoso central (SNC) e cardiovascular, e o uso de inibidores naturais pode mitigar esses efeitos. A partir de clones de MMP-9 recombinante (com e sem atividade), faremos sua expressão e purificação. As enzimas serão administradas diretamente no SNC de camundongos C57BL/6 adultos, para avaliar o efeito do aumento da MMP-9 sobre plasticidade de redes perineurais (zimografia in situ, coloração histológica e imunofluorescência), na resposta de receptores GABAérgicos e Glutamatérgicos (eletrofisiologia e imunofluorescência), no sistema redox (ensaios bioquímicos) e no comportamento (labirinto em cruz elevado, interação social, reconhecimento de objetos, campo aberto e Irwin). Examinaremos as repercussões dessa administração no sistema cardiovascular por injeção intravenosa, avaliando a pressão arterial, frequência cardíaca e condução elétrica do coração. Adicionalmente, realizaremos experimentos em corações isolados (Langendorff) e vasos sanguíneos (reatividade vascular). Investigaremos a participação da MMP-9 nas alterações do SNC e cardiovascular durante o envelhecimento utilizando animais selvagem e nocautes para MMP-9 exploraremos a questão do remodelamento, marcadores inflamatórios, sistema redox e a expressão gênica e proteica de proteínas ligadas a remodelamento, inflamação e estresse oxidativo. Como estratégia terapêutica, extratos naturais serão desenvolvidos, caracterizados por fitoquímica (absorção atômica e HPLC-MS) e avaliados quanto ao potencial inibitório sobre MMP-9. Estudos de docking molecular (AutoDock e GROMACS) serão realizados para identificar compostos promissores. O extrato mais eficiente será testado in vivo em modelos experimentais de hipertensão e distúrbios neuropsiquiátricos.