Produção de partículas semelhantes a vírus (VLPs) em plataforma vegetal para fins terapêuticos no câncer gástrico

O câncer gástrico constitui a terceira maior causa de morte por câncer no mundo e ocupa a quinta posição em incidência. No Brasil, é o terceiro tipo mais frequente entre homens e o quinto entre as mulheres, apresentando uma elevada taxa de óbito, na ordem de 65% dos indivíduos acometidos. Muitos desses alarmantes dados são consequência da falta de diagnóstico precoce, de direcionamento terapêutico e de acesso ao principal tratamento disponível para tal câncer, que é o cirúrgico. Quimioterapia, imunoterarapia e radioterapia têm consideráveis limitações quanto à eficiência no combate a esse tipo tumoral, de tal modo que se torna mandatória a elaboração de novas estratégias. Uma alternativa possível baseia-se na utilização de Partículas Semelhantes a Vírus (VLPs), que são estruturas compostas de proteínas estruturais que mimetizam a partícula viral sem, todavia, carrear o material genético do vírus. Os VLPs podem ser projetados para encapsular agentes terapêuticos e de contraste, bem como direcionados a ligantes para atingir tecidos específicos usando modificações químicas e genéticas. Essas propriedades possibilitam uma ampla gama de aplicações na terapia do câncer, na imunoterapia e no diagnóstico por imagem. De particular interesse, os VLPs do vírus do mosaico do feijão-caupi (CPMV) exibiram eficácia no tratamento e na imunidade antitumoral sistêmica em modelos de tumor de ovário, de cólon e de mama em vários locais anatômicos. Contudo, sua eficácia ainda não foi avaliada em modelos de tumor gástrico. Assim, dentre as várias plataformas disponíveis, sugere-se a utilização do sistema de expressão em planta para produzir VLPs do CPMV recombinantes. No contexto da fabricação biofarmacêutica, o uso de plantas como sistema de expressão de VLPs possui vantagens quando comparado com sistemas microbiano e animal. Entre elas estão: rápida produção em larga escala; baixo custo de produção upstream; ausência de risco de contaminação por patógenos humanos ou animais; e capacidade de sintetizar proteínas complexas com modificações pós-traducionais. Os VLPs serão produzidos em Nicotiana benthamiana e purificados por ultracentrifugação com gradiente de sacarose. Para confirmar a presença e a funcionalidade dos VLPs, estes serão analisados por microscopia eletrônica de transmissão, SDS-PAGE e imunoblotting. Por sua vez, será investigado o potencial do CPMV no delivery da droga 5-fluorouracil (5-FU), um quimioterápico comumente usado contra o câncer. Diante disso, buscaremos investigar a influência do CPMV e do CPMV conjugado ao 5-FU sobre a carcinogênese e resposta a drogas em modelo in vitro de câncer gástrico. Posteriormente, avaliaremos os seus efeitos nas atividades celulares, no que tange à viabilidade, apoptose, controle do ciclo celular, migração, invasão e danos ao DNA. No geral, utilizando essa estratégia, é possível, numa única formulação, combinar obtenção de imagens por fluorescência e/ou delivery de drogas, o que possibilitará um melhor diagnóstico e tratamento para o câncer gástrico.