Padrões comparativos do transcriptoma no queloide/cicatriz hipertróficas e doenças queloidiformes

1.2. Síntese (em ate dois mil caracteres com espaçamento) INTRODUÇÃO: A fibrose de pele é caracterizada pela proliferação de fibroblastos e a síntese em excesso de proteínas da matriz extracelular como colágeno, elastina e fibrilina.(1) Representa característica principal de diversas doenças, como esclerodermia, queloide, cicatriz hipertrófica e doença do enxerto versus hospedeiro. Comparando queloides e cicatrizes hipertróficas, aqueles contêm fibras grandes e grossas de colágeno, compostas por numerosas fibrilas estreitamente agrupadas. Em contraste, as cicatrizes hipertróficas exibem estruturas nodulares nas quais células fibroblásticas, pequenos vasos e fibras colágenas finas e organizadas aleatoriamente estão presentes. Os guidelines para o tratamento de cicatrizes fibroproliferativas, queloide e cicatrizes hipertróficas, sugerem a combinação de duas ou mais modalidades terapêuticas, a depender da topografia da lesão, caracterizando um tratamento multimodal. A literatura evidencia uma taxa de recorrência do queloide após sua excisão cirúrgica variando de 20 a 80%, de acordo com a combinação do tratamento. Diante da complexidade do tratamento das cicatrizes patológicas muitas pesquisas são realizadas no intuito de elucidar mais a sua fisiopatologia. Neste contexto, há outras doenças fibroproliferativas que tem semelhanças aos aspectos mencionados das cicatrizes patológicas. No Brasil, especialmente na região Amazônica, a Lacaziose, ou Doença de Jorge Lobo, apresenta um dos seus pólos que se assemelha muito ao aspecto de cicatriz queloideana e tem como fator etiológico o fungo Lacazia loboi. O papel genético no desenvolvimento das cicatrizes patológicas não parece ser apenas de caráter monogênico mendeliano, mas envolve uma desordem oligogênica. A análise do transcriptoma inteiro tem como meta capturar o RNA codificado e o não codificado e quantificar a heterogeneidade da expressão gênica nas células, tecidos, órgãos e até mesmo no corpo inteiro.(21) Na literatura não se tem ainda a análise do miRNA de doença queloideforme como a Lacaziose, comparando-o com a sequência de miRNA de queloides/cicatrizes hipertróficas. OBJETIVO: Caracterizar os perfis de resposta sanguínea e tecidual a partir da comparação do transcriptoma (mRNA e miRNA) em cicatrizes queloideanas, hipertróficas e de lesões de aspecto queilodiforme, na Lacaziose, inferindo acerca dos achados do transcriptoma e sua importância no manejo clínico e cirúrgico em cada grupo de paciente MÉTODO: A casuística do estudo será composta por 40 pacientes, dispostos em 4 grupos, cada um com 10 pacientes, os quais são: Grupo Queloide, Grupo Cicatriz Hipertrófica, Grupo Doença Queloideforme, Grupo Controle. Pacientes serão submetidos à biópsia das lesões e coleta de sangue após preencher os critérios de inclusão e assinar o TCLE. A cirurgia será realizada em caráter ambulatorial. As amostras lesionais serão seccionadas e acondicionadas em formol à 10% para análise histopatológica e uma segunda amostra acondicionada em nitrogênio líquido ou RNA later para a análise molecular, a qual será realizada no Laboratório de Engenharia Biológica da UFPA . De cada paciente, o RNA total será extraído de fragmentos de biópsia de pele das lesões. A análise de qualidade do RNA será realizada em gel de agarose e formaldeído. Em resumo, para a análise do mRNA, inicialmente o mRNA será purificado a partir o RNA total e posteriormente uma biblioteca de cDNA será obtida e sequenciada na plataforma Ion GeneStudio S5 (Thermo Fisher Scientific). As leituras oriundas do sequenciador serão tratadas para remoção de sequencias de baixa qualidade. A expressão gênica será calculada pela quantificação do número de leituras brutas mapeada contra os genes alvo montados. A contagem bruta do mapeamento será normalizada pelo método do RPKM e a expressão diferencial aos pares será determinada no DeSeq para genes com fold change > 2 e p ≤ 0,05DESFECHOS: Cicatrizes patológicas (queloide e cicatrizes hipertróficas e Doença queloideforme (Lacaziose) têm o mesmo padrão de transcriptoma. A análise de padrões de miRNAs podem mostrar similaridade entre as cicatrizes patológicas e doença queloideforme, mostrando o que está hiperexpresso ou não.